RFLP and STR Analysis Explanation

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Hallo! 👋

Basierend auf dem Bild, das du geschickt hast, scheint es sich um eine Darstellung von zwei verschiedenen molekularbiologischen Techniken zu handeln: RFLP-Analyse (Restriction Fragment Length Polymorphism) durch Southern Blotting und STR-Analyse (Short Tandem Repeat) in Kombination mit PCR (Polymerase Chain Reaction).

RFLP-Analyse durch Southern Blotting

Die RFLP-Analyse ist eine Technik, die verwendet wird, um Unterschiede in homologen DNA-Sequenzen zu erkennen, indem Unterschiede in den Mustern der Restriktionsfragmentlängen untersucht werden. Hier ist eine kurze Zusammenfassung der Schritte, die in der Abbildung dargestellt sind:

  1. Herstellung der Restriktionsfragmente: DNA wird mit Restriktionsenzymen geschnitten, die die DNA an spezifischen Sequenzen erkennen und schneiden.
  2. Gelelektrophorese: Die DNA-Fragmente werden durch Gelelektrophorese aufgetrennt. Kleinere Fragmente wandern schneller durch das Gel als größere Fragmente.
  3. Kapillarkräfte: Die DNA wird vom Gel auf eine Nitrocellulosemembran übertragen. Dies geschieht durch Kapillarkräfte, die eine alkalische Lösung durch das Gel und die Membran ziehen, wodurch die DNA denaturiert und an die Membran gebunden wird.
  4. Hybridisierung mit einer radioaktiven Sonde: Die Membran wird mit einer radioaktiven DNA-Sonde hybridisiert, die komplementär zu einer spezifischen DNA-Sequenz ist. Die Sonde bindet an die DNA-Fragmente, die die komplementäre Sequenz enthalten.
  5. Autoradiographie: Die Membran wird einem Röntgenfilm ausgesetzt. Die radioaktive Sonde macht die DNA-Fragmente sichtbar, an die sie gebunden hat. Die Bandenmuster der Probe werden sichtbar.

Ich hoffe, diese Erklärung hilft dir weiter! Lass mich wissen, wenn du noch Fragen hast. 😊

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Hallo! 👋

Das Bild zeigt eine schematische Darstellung der Polymerase-Kettenreaktion (PCR) und der Gelelektrophorese, die oft in Kombination verwendet werden, um DNA-Fragmente zu amplifizieren und zu analysieren. Hier ist eine Erläuterung der einzelnen Schritte:

Polymerase-Kettenreaktion (PCR)

Die PCR ist eine Methode zur Amplifikation spezifischer DNA-Sequenzen. Sie besteht aus mehreren Zyklen, die jeweils aus drei Schritten bestehen:

  1. Denaturierung: Die doppelsträngige DNA wird auf etwa 95 °C erhitzt, um sie in Einzelstränge aufzutrennen.
  2. Hybridisierung (Annealing): Die Temperatur wird auf etwa 60 °C gesenkt, damit Primer an die einzelsträngige DNA binden können. Primer sind kurze DNA-Sequenzen, die komplementär zu den Enden der zu amplifizierenden DNA-Sequenz sind.
  3. Polymerisation (Extension): Die Temperatur wird auf etwa 72 °C erhöht, die optimale Temperatur für die Taq-Polymerase. Die Taq-Polymerase ist ein hitzebeständiges Enzym, das die DNA-Synthese startet und die komplementären Stränge der DNA-Sequenz erzeugt.

Diese Zyklen werden wiederholt, um die Anzahl der DNA-Fragmente exponentiell zu erhöhen.

Gelelektrophorese

Die Gelelektrophorese ist eine Methode zur Trennung von DNA-Fragmenten nach ihrer Größe. Die DNA-Fragmente werden in ein Gel gegeben und eine elektrische Spannung angelegt. Da DNA negativ geladen ist, wandern die Fragmente zur positiven Elektrode. Kleinere Fragmente wandern schneller durch das Gel als größere Fragmente.

Nach der Elektrophorese können die DNA-Fragmente sichtbar gemacht werden, z. B. durch Anfärben mit einem Farbstoff, der an DNA bindet. Die DNA-Fragmente erscheinen dann als Banden im Gel. Die Position der Banden gibt Auskunft über die Größe der DNA-Fragmente.

Ich hoffe, diese Erklärung hilft dir weiter! Lass mich wissen, wenn du noch Fragen hast. 😊

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